無菌試驗是什么？

無菌試驗（Sterility test）是一種微生物檢驗方法，用以確認(rèn)規(guī)范應(yīng)為無菌的產(chǎn)品是否受到微生物污染，常見于醫(yī)藥、生物科技、醫(yī)療器材制造等領(lǐng)域。

無菌試驗的目的

無菌試驗適用于絕大多數(shù)規(guī)定為無菌的醫(yī)藥產(chǎn)品，如注射劑、眼藥水、固體藥物、各式無菌醫(yī)材等，應(yīng)用的產(chǎn)品范圍非常廣泛。

如果這些產(chǎn)品受到微生物污染，在接觸人體后可能導(dǎo)致藥效降低，甚至引發(fā)感染和其他嚴(yán)重并發(fā)癥。 因此，無菌試驗的主要目標(biāo)是保障規(guī)定為無菌的藥品、醫(yī)療器材在經(jīng)過無菌制程（Aseptic manufacturing）、*終滅菌（Terminal sterilization）等出廠前作業(yè)流程后，不存在活體微生物，使其在臨床使用上不會影響藥效或是造成感染。

無菌的定義與國際規(guī)范

無菌的定義

無菌是指樣品中不含活體微生物，為保障醫(yī)藥產(chǎn)品安全性的基礎(chǔ)要求。 國際上常以「無菌保證程度（Sterility Assurance Level， SAL）」作為滅菌確效的基準(zhǔn)，若SAL ≤ 10-6（樣品殘存的微生物污染機率小于等于百萬分之一）即符合無菌要求。

無菌試驗的國際規(guī)范

國際規(guī)范如ISO 11737-2、美國藥典（USP <71>）、歐洲藥典（EP）、日本藥典（JP）、中華藥典等技術(shù)規(guī)范中，均明文要求無菌試驗的檢驗環(huán)境、樣品制備與作流程，確保產(chǎn)品的無菌試驗方式符合全球性的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，也為試驗結(jié)果的可靠性提供保障。

無菌試驗怎么做？

常見的無菌試驗方法有兩種，分別是「微孔濾膜過濾法（Membrane Filtration Method）」和「直接接種法（Direct Inoculation Method）」。 根據(jù)國際醫(yī)藥品稽查協(xié)約組織（PIC/S）的規(guī)范，微孔濾膜過濾法和直接接種法皆需要在B級以上的無菌無塵室內(nèi)之A級無菌作臺進行，作前可依據(jù)樣品特性選擇適合的作方法。

無菌試驗方法一：微孔濾膜過濾法

微孔濾膜過濾法是目前無菌試驗*常用的方法之一，適合液體樣品、固體樣品、具管線的醫(yī)療器材等可沖洗、使用濾膜過濾的樣品。

微孔濾膜過濾法的原理是將樣品利用孔徑小于0.45um的濾膜進行過濾，攔截可能存在的微生物，再將濾膜轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中進行培養(yǎng)，檢測樣品中是否有活體微生物的存在。

微孔濾膜過濾法所需設(shè)備

微孔濾膜過濾法所需設(shè)備通常包含真空泵、過濾座與濾膜。 若選用可重復(fù)使用之不銹鋼過濾杯，除了可以高溫高壓滅菌 （autoclave） 之外，也可以搭配本生燈進行火焰滅菌，有效節(jié)省滅菌時間。

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微孔濾膜過濾法作流程

微孔濾膜過濾法的作流程大致可分為四階段：樣品預(yù)處理、樣品過濾、濾膜培養(yǎng)和結(jié)果判定，以下將依序說明。

1.樣品預(yù)處理：依據(jù)樣品的性質(zhì)，進行微孔濾膜過濾法前需先做不同的預(yù)處理，處理方式可參考下表。

2.樣品過濾：將預(yù)處理好的樣品倒入過濾杯內(nèi)，啟動真空泵產(chǎn)生負(fù)壓，將樣品通過濾膜過濾。 若樣品數(shù)量較多，可采用多連過濾座。

3.濾膜培養(yǎng)：過濾完成后，使用無菌鑷子將濾膜轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中密封，并置于培養(yǎng)箱用適當(dāng)溫度培養(yǎng)14日以上。

4.結(jié)果判定：觀察培養(yǎng)基是否變得混濁，以判斷是否有微生物生長。 若培養(yǎng)基沒有變化，表示無微生物生長，判定為符合無菌試驗規(guī)定; 若培養(yǎng)基變得混濁，則表示樣品中有活體微生物，則判定為不符合無菌試驗規(guī)定。

無菌試驗方法二：直接接種法

直接接種法是針對不適合使用濾膜過濾的樣品而設(shè)計的無菌試驗方法，例如無法過濾的溶液、無法溶解的固體或醫(yī)療器材等。 直接接種法直接將待測樣品置入適當(dāng)培養(yǎng)基中，藉由觀察培養(yǎng)基中微生物的生長狀況來判定樣品的無菌性。

直接接種法作流程

直接接種法的作流程大致可分為三階段：樣品預(yù)處理、培養(yǎng)基培養(yǎng)和結(jié)果判定，以下將依序說明。

1.樣品準(zhǔn)備：將樣品準(zhǔn)備完成后，放入培養(yǎng)基內(nèi)。

2.培養(yǎng)基培養(yǎng)：將培養(yǎng)基密封放入培養(yǎng)箱，并于適當(dāng)溫度培養(yǎng)14天以上。

3.結(jié)果判定：觀察培養(yǎng)基是否變得混濁，以判斷是否有微生物生長，并記錄結(jié)果。 若培養(yǎng)基沒有變化，表示無微生物生長，判定為符合無菌試驗規(guī)定; 若培養(yǎng)基變得混濁，則表示樣品中有活體微生物，則判定為不符合無菌試驗規(guī)定。

無菌試驗方法比較：微孔濾膜過濾法與直接接種法

微孔濾膜過濾法與直接接種法兩種無菌試驗方法各有其適用范圍與優(yōu)勢，進行無菌試驗前應(yīng)根據(jù)樣品特性選擇合適的方法，以確保試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。

無菌試驗方法總結(jié)

無菌試驗是醫(yī)藥與生技領(lǐng)域不可或缺的重要微生物檢測手段，透過微孔濾膜過濾法與直接接種法，能有效檢測產(chǎn)品是否受到微生物污染，進而保障藥品與醫(yī)療器材的穩(wěn)定與使用的安全性！

附錄：微孔濾膜過濾法的真空過濾設(shè)備選擇

利用微孔濾膜過濾法進行無菌試驗前，需選擇可靠的過濾設(shè)備。 真空過濾系統(tǒng)是一種高效且經(jīng)濟的實驗室過濾設(shè)備，能滿足各類樣品的過濾需求。

真空過濾系統(tǒng)的組合內(nèi)含：真空泵（或直接排水式抽水泵）、過濾座（三連座、六連座或十二連座）、濾膜，以及火焰滅菌本生燈，您可以依據(jù)實驗需求，自由搭配*適合的組合。

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